所谓脱水就是利用脱水剂将组织内的水分置换出来，以利于有机溶剂的渗入。在脱水前，固定后的组织应该水洗（10～20分钟），否则易造成脱片和染色不鲜艳，也不利于蜡块内抗原的长期保存。脱水是否彻底，直接关系到组织是否能充分透明。过去习惯认为脱水主要跟高浓度乙醇有关，而忽视了与低浓度乙醇的关系，其实75-80%浓度的乙醇具有极强穿透力，在短时间内可以置换出大量的水份，而高浓度乙醇容易使蛋白质凝固，在组织表面形成一层硬壳，乙醇难以渗透到组织块中间去，导致组织脱水不佳；高浓度乙醇的作用是脱去从低浓度到高浓度之间的水份。如果脱水时加温过高（36-50℃）、使用丙酮等，都易导致组织收缩过度、发硬和发脆。

组织脱水引起的组织发脆有三种原因：一是初始脱水液浓度过高引起组织质地发生改变、硬化；二是组织质地过于细腻，如小动物肝脏；第三种是假脆（也是组织发脆的最主要原因），由于脱水不足，组织在浸蜡时蜡无法渗透到组织中去，在高温下“干烤”导致发硬、发脆，切片会出现粉粉的或一丝丝的现象，子宫肌瘤等较硬的组织还会出现一棱棱的现象，甚至会整块整块往外崩；严重脱水不足的组织中间发软、凹陷，甚至还会有水。

脱水的关键是调整低浓度和高浓度乙醇脱水时间的正确搭配，低浓度乙醇可以使组织收缩减少，利于切片，高浓度乙醇使组织脱水更彻底。一般情况下，标本脱水时间（35℃）为75％乙醇1.5h、85％乙醇2h、95％乙醇（2道大）各1.5h至2h、无水乙醇（2道）各1.5h至2h。小标本脱水时间与大标本差异不大，一般没必要分开，小标本发脆，往往是因为纸包太厚或相互粘在一起，导致组织脱水不彻底引起。固定好的淋巴组织，应从低浓度乙醇开始脱水，在95%乙醇中的时间延长至4h左右，以便彻底脱水。

脱水时间长短，与室温密切相关,同时也与组织的厚薄、组织类型、组织固定程度等条件相关。一般而言，12～15℃的室温，可作为一个临界温度值。当室温高于此温度时，组织容易脱水，可适当缩短脱水时间；室温低于该温度时，应适当延长脱水时间。从规范化角度出发，应该尽可能地保持温度、浓度和作用时间的恒定。使用全封闭自动脱水机更易标准化。更换脱水液，应以量为基础，定量更换。根据我科经验，如试剂用量为500ml，每500个蜡块更换一次为宜。在更换脱水液时，为保证准确的低浓度乙醇的浓度，不提倡全部试剂向前退的方法。85%乙醇退到75%乙醇，95%乙醇退到85%乙醇，无水乙醇退到95%乙醇，是不正确的。第二道的95%乙醇可以退到第一道95%乙醇，第二道无水乙醇也可以退到第一道无水乙醇。由于脱过水的乙醇含有大量的脂肪和蛋白质，因此，最好全部更换，保证各梯度乙醇的真正浓度。

常规切片脱水的原则是在最短的时间内，使组织脱水彻底，收缩度、硬度适中，切片舒展、保证质量。在固定充分的情况下，组织在乙醇甚至无水乙醇内长时间乃至几天停留，均不会导致组织发脆。